質譜儀是一種常用于生化學和結構生物學研究中的工具,用于檢測大分子如蛋白質、核酸、多肽、多糖等的分子組成,結構和相互作用。本文將詳細介紹質譜儀的工作原理、應用領域及檢測大分子的方法。
一、質譜儀的工作原理: 質譜儀是將分子分離、荷質比分析和檢測作為整體的分析儀器。它的基本工作原理是將待分析的生物大分子先經過電離,然后通過一系列的分析和檢測,得到荷質比譜圖。在荷質比譜圖中,質量軸顯示的是被檢測分子的荷質比,而強度軸則顯示了荷質比與該荷質比下所檢測到的離子的數量之間的關系。
二、質譜儀的應用領域: 質譜儀廣泛應用于結構生物學、代謝組學、基因組學等領域。主要包括以下幾個方面: 1、蛋白質組學:用質譜儀檢測蛋白質的氨基酸序列、翻譯后修飾和亞細胞定位等信息。 2、代謝組學:用質譜儀檢測代謝中產生的代謝產物和代謝途徑,以及代謝物與代謝物間的關系。 3、基因組學:用質譜儀檢測 DNA 中的堿基序列、DNA 損傷和 DNA 甲基化等信息,以及 RNA 中的轉錄后修飾信息。 4、藥物代謝學:用質譜儀檢測藥物的代謝途徑和藥物與代謝產物的結合情況,為藥物研發(fā)提供依據。
三、檢測生物大分子的方法: 1、MALDI-TOF: MALDI-TOF 是一種常用的質譜儀技術,能夠檢測生物大分子如蛋白質、核酸和小分子等,在制備和分析生物大分子方面優(yōu)于傳統(tǒng)的電泳和測序方法。該技術依靠凝膠絲片或核磁共振成像等技術制備樣品,然后通過脈沖激光產生離子,離子經過飛行管道,荷質比得到分析。在獲得符合預期的分析數據后,初定位趨勢分子中特定殘基發(fā)生的修飾或分子的氨基酸序列。 2、ESI-MS: ESI-MS 是一種通過樣品液壓的電噴霧機加熱,使溶液中的大分子荷質比分析的方法。針對脂質、糖質和多硫化物等復合物,使用 ESI-MS 檢測和分析細胞膜和細胞器顆粒中的蛋白質質譜分布圖,分析分子生物學和生物化學作用、細胞的代謝和信號傳遞等方面。ESI-MS 主要用于鑒定藥物、蛋白質、核酸等生物大分子化合物的結構和復雜的分析。 3、Q-TOF: 二級 Q-TOF 顏色荷質比譜圖是一種輸帶離子的技術,是利用極其高精度的質譜儀捕獲生物大分子之間的交互作用。這種技術利用 Q-TOF 技術結合 MRM (多反應監(jiān)測法)檢測一個物質的正常級別,同時檢測它的同位素標記物,使用標記物代替藥物,修改和測試推薦的方案和測試著手的實驗概念是重要的思路。 4、Ion Trap: 在 Ion Trap 檢測中,離子會被捕獲和留在陷進中,直到它們被逼入諧振器中的一個區(qū)域,重現荷質比圖并在MS中讀取荷質比譜圖的制備。Ion Trap 技術的優(yōu)勢在于它的速度和解析度較高,可以在較短的時間內快速測量生物大分子化合物的氨基酸序列和結構。Ion Trap 還可以通過選擇安裝離線電離源而提高樣品利用率,它可以在體積小、重量小的情況下對生物大分子化合物進行快速測量,通常被用于從生物體內檢測出方子和命名生物大分子化合物。
總結: 質譜儀是生命科學和醫(yī)學研究中不可或缺的工具,是一種通過分離和分析生物大分子,獲取化學信息的高級技術。通過使用不同的質譜儀技術,可以檢測生物大分子的數量、結構、組成和相互作用,為研究生命科學和醫(yī)學健康問題提供了很大的幫助。